Please use this identifier to cite or link to this item:
https://olympias.lib.uoi.gr/jspui/handle/123456789/39670| Title: | Ανάπτυξη πρότυπης μεθόδου απομόνωσης κοκκωδών κυττάρων από ωοθυλακικό υγρό με χρήση μαγνητικών νανοϋλικών μετά από διέγερση των ωοθηκαλίων |
| Institution and School/Department of submitter: | Πανεπιστήμιο Ιωαννίνων. Σχολή Επιστημών Υγείας |
| Keywords: | Κύτταρα ωοθήκης,Ωοθυλακικό υγρό,Μαγνητικά νανοϋλικά,Ωοθυλάκια,Υπογονιμότητα,Κοκκώδη κύτταρα ωοθήκης,Ωοθήκες |
| URI: | https://olympias.lib.uoi.gr/jspui/handle/123456789/39670 |
| Table of contents: | Πίνακας περιεχομένων Πρόλογος ........................................................................................................................................ 1 Πίνακας περιεχομένων .................................................................................................................. 5 1. Εισαγωγή .................................................................................................................................. 15 1.1 Υπογονιμότητα .................................................................................................................... 15 1.1.1. Ορισμός και Ταξινόμηση της Υπογονιμότητας ........................................................... 15 1.1.2. Παράγοντες Υπογονιμότητας ...................................................................................... 18 1.1.2.1 Γυναικείος παράγοντας Υπογονιμότητας .............................................................. 18 1.1.2.2 Ανδρικός Παράγοντας Υπογονιμότητας ................................................................ 23 1.1.2.3 Γενετικοί Παράγοντες Υπογονιμότητας ................................................................. 26 1.1.2.4 Περιβαλλοντικοί Παράγοντες Υπογονιμότητας .................................................... 29 1.1.2.5 Ιδιοπαθής Υπογονιμότητα ..................................................................................... 32 1.1.3. Αξιολόγηση υπογονιμότητας – Η προσέγγιση του υπογόνιμου ζευγαριού ............... 35 1.1.3.1. Κλινική και εργαστηριακή προσέγγιση................................................................. 37 1.1.3.2. Εκτίμηση της λειτουργικότητας των ανατομικών στοιχείων της γυναίκας ......... 40 1.1.3.3. Εκτίμηση της Λειτουργικότητας των Ανατομικών Στοιχείων του Άνδρα ............. 43 1.1.4. Αντιμετώπιση της Υπογονιμότητας ............................................................................. 46 1.1.4.1. Τροποποίηση του τρόπου ζωής και συντηρητικές παρεμβάσεις ........................ 46 1.1.4.2. Φαρμακευτική αντιμετώπιση ............................................................................... 48 1.1.4.3. Χειρουργική αντιμετώπιση ................................................................................... 51 1.1.4.4. Τεχνικές υποβοηθούμενης αναπαραγωγής ......................................................... 54 1.1.5. Η διερεύνηση της γυναικείας υπογονιμότητας .......................................................... 58 1.2 Ορισμός και γενικά χαρακτηριστικά των κοκκωδών κυττάρων ......................................... 59 1.2.1 Ιστορική αναδρομή της μελέτης των κοκκωδών κυττάρων ......................................... 59 1.2.2 Σημασία των Κοκκωδών Κυττάρων στη Φυσιολογία του Θηλυκού Αναπαραγωγικού Συστήματος ........................................................................................................................... 61 1.2.2.1. Υποστήριξη της Ανάπτυξης και Ωρίμανσης των Ωοκυττάρων.............................. 62 1.2.2.2. Παραγωγή και Ρύθμιση Στεροειδών Ορμονών .................................................... 63 1.2.2.3. Ρύθμιση της Ωορρηξίας ........................................................................................ 63 1.2.2.4. Συμβολή στον Σχηματισμό και τη Διατήρηση του Ωχρού Σώματος ..................... 64 1.2.2.5. Δείκτης Ποιότητας των Ωοκυττάρων .................................................................... 65 1.2.3 Βιολογικός ρόλος και λειτουργία κοκκωδών κυττάρων .............................................. 65 1.2.3.1 Συμμετοχή των Κοκκωδών Κυττάρων στη Στήριξη και Ανάπτυξη του Ωοκυττάρου ... 65 1.2.3.2 Ενδοκρινικός και Παρακρινικός Ρόλος των Κοκκωδών Κυττάρων (Παραγωγή Ορμονών και Αυξητικών Παραγόντων) ............................................................................. 67 6 1.2.3.3 Διαφοροποίηση και Μοριακοί Μηχανισμοί Ρύθμισης των Κοκκωδών Κυττάρων68 1.2.4 Κοκκώδη Κύτταρα και Ωοθυλακική Ανάπτυξη ............................................................. 69 1.2.4.1 Ρόλος των Κοκκωδών Κυττάρων στα Διάφορα Στάδια της Ανάπτυξης του Ωοθυλακίου ....................................................................................................................... 69 1.2.4.2 Αλληλεπιδράσεις με τα Θυλακικά Κύτταρα και το Ωοκύτταρο ............................ 70 1.2.4.3 Ρυθμιστικοί Μηχανισμοί (FSH, LH, Αυξητικοί Παράγοντες) ................................. 71 1.2.5 Μεταβολικές και Μοριακές Ιδιότητες των Κοκκωδών Κυττάρων ............................... 72 1.2.5.1 Ενεργειακός μεταβολισμός και υποστήριξη του ωοκυττάρου ............................. 72 1.2.5.2 Γονιδιακή έκφραση και μοριακοί δείκτες ............................................................. 73 1.2.5.3 Σημαντικές πρωτεΐνες και σηματοδοτικά μονοπάτια ........................................... 74 1.2.6 Διαδικασία Διαφοροποίησης και Ενεργοποίησης των Προκοκκωδών Κυττάρων στην Ανάπτυξη των Ωοθυλακίων και τη Λειτουργία των Ωοθηκών. ............................................. 75 1.2.6.1 Εμβρυονικοί Προγεννήτορες ................................................................................. 75 1.2.6.2 Κυτταροκίνηση των Ωοθυλακίων .......................................................................... 76 1.2.6.3 Ενεργοποίηση Ανεξάρτητη από Γοναδοτροπίνες & Ενεργοποίηση της Ανάπτυξης .... 76 1.2.6.4 Πολλαπλασιασμός στο Προαντρικό Στάδιο .......................................................... 77 1.2.6.5 Διαφοροποίηση στο Προωρηκτικό Στάδιο ............................................................ 77 1.2.6.6 Ωοφόρα Κύτταρα και Στεροειδογένεση ................................................................ 77 1.2.6.7 Ωορρηξία και Τελική Διαφοροποίηση: Ωχρινοποίηση .......................................... 78 1.2.6.8 Γήρανση των Κοκκωδών Κυττάρων ....................................................................... 78 1.2.7 Σημασία των κοκκωδών κυττάρων στην αναπαραγωγική ιατρική .............................. 78 1.2.7.1 Ρόλος τους στην ποιότητα του ωοκυττάρου και στη γονιμοποίηση .................... 79 1.2.7.2 Συσχέτιση με τη γυναικεία γονιμότητα και τη θεραπεία υπογονιμότητας .......... 80 1.2.7.3 Δυνατότητες Εφαρμογών στη Βιοϊατρική και στην Υποβοηθούμενη Αναπαραγωγή .................................................................................................................... 81 1.2.8 Μεθοδολογικές Προσεγγίσεις για τη Μελέτη των Κοκκωδών Κυττάρων ................... 82 1.2.8.1 Κυτταρολογικές και ιστολογικές μέθοδοι ............................................................. 82 1.2.8.2 Γονιδιακή Ανάλυση και Ανάλυση Έκφρασης Γονιδίων.......................................... 84 1.2.8.3 Ανάλυση Προφίλ Πρωτεϊνών και Πρωτεομική Ανάλυση ...................................... 87 1.2.8.4 Κυτταρική καλλιέργεια και Πειράματα Κινητικότητας και Πολλαπλασιασμού ........ 90 1.2.8.5 Ανάλυση Ενδοκρινικής Δραστηριότητας και Σηματοδοτικών Μονοπατιών ......... 93 1.2.9 Τεχνικές απομόνωσης κοκκωδών κυττάρων ............................................................... 96 1.2.9.1 Μηχανική Απομόνωση (Mechanical Isolation) ...................................................... 96 1.2.9.2 Ενζυμική Απομόνωση ............................................................................................ 98 1.2.9.3 Ανάλυση με FACS ................................................................................................. 101 1.2.9.4 Μαγνητική απομόνωση ....................................................................................... 105 7 1.3 Νανοϋλικά ......................................................................................................................... 108 1.3.1 Χαρακτηριστικά νανοϋλικών ...................................................................................... 109 1.3.1 Διαχωρισμός νανοϋλικών με βάση το μέγεθος ......................................................... 112 1.3.2 Μαγνητικά νανοϋλικά ................................................................................................ 114 1.3.3 Εφαρμογές νανοϋλικών και μαγνητικών νανοϋλικών ............................................... 116 1.3.4 Νανοσωματίδια μαγνητίτη ........................................................................................ 120 2. Σκοπός της ερευνητικής εργασίας ......................................................................................... 125 3. Πειραματικό μέρος ................................................................................................................. 127 3.1 Αντιδραστήρια και διαλύτες ............................................................................................. 127 3.2 Υλικά και εξοπλισμός ........................................................................................................ 128 3.3 Πειραματικές πορείες ....................................................................................................... 129 3.3.1. Σύνθεση μαγνητικών νανοσωματιδίων Fe₃O₄ .......................................................... 129 3.3.2 Επικάλυψη μαγνητικών νανοσωματιδίων με SiO2 ..................................................... 129 3.3.3 Λειτουργικοποίηση νανοσωματιδίων με υαλουρονικό οξύ (HA) .............................. 130 3.3.5 Ασθενείς και συλλογή δειγμάτων .............................................................................. 130 3.3.6 Διαδικασία απομόνωσης κυττάρων ........................................................................... 131 3.3.7 Καταμέτρηση απομονωμένων κυττάρων .................................................................. 132 3.3.8 Καλλιέργεια κυττάρων ............................................................................................... 133 3.3.9 Βιωσιμότητα κυττάρων .............................................................................................. 133 3.3.10 Μέθοδος απομόνωσης λευκών και ερυθρών κυττάρων. ........................................ 134 3.3.11 Μέθοδος απομόνωσης κυττάρων με φικόλη. ......................................................... 135 3.3.12 Μέθοδος απομόνωσης κυττάρων με FACS. ............................................................. 136 3.3.13 Στατιστική ανάλυση .................................................................................................. 136 4. Αποτελέσματα και συζήτηση ................................................................................................. 139 4.1 Χαρακτηρισμός νανοσωματιδίων ..................................................................................... 139 4.1.1. Χαρακτηρισμός των νανοϋλικών μέσω FTIR ............................................................. 139 4.1.2. Χαρακτηρισμός του μεγέθους και του φορτίου των νανοϋλικών με DLS ................ 143 4.2 Βελτιστοποίηση μεθόδου απομόνωσης GCs .................................................................... 145 4.2.1 Βελτιστοποίηση φυγοκέντρησης και εκπλύσεων ...................................................... 145 4.2.2 Βελτιστοποίηση μοριακού βάρους ΗΑ ...................................................................... 147 4.2.3 Βελτιστοποίηση ποσότητας νανοϋλικών ................................................................... 150 4.2.4 Βελτιστοποίηση χρόνου επώασης ............................................................................. 152 4.2.5 Βελτιστοποίηση έντασης μαγνητικού πεδίου ............................................................ 154 4.2.6 Βελτιστοποίηση ποσότητας και χρόνου επώασης με υαλουρονιδάση ........................ 156 4.3 Μελέτη Εκλεκτικής δέσμευσης κυττάρων ........................................................................ 158 8 4.4 Μελέτη τοξικότητας νανοϋλικών ...................................................................................... 169 4.5 Μελέτη βιωσιμότητας απομονωμένων κυττάρων ........................................................... 172 4.6 Μελέτη μεταβολικής δραστηριότητας απομονωμένων κυττάρων .................................. 174 4.7 Επικύρωση της μεθόδου ................................................................................................... 176 4.8 Σύγκριση με υφιστάμενες μεθόδους ................................................................................ 178 5. Συμπεράσματα ....................................................................................................................... 183 6. Περίληψη ................................................................................................................................ 187 7. Abstract ................................................................................................................................... 189 8. Βιβλιογραφία ......................................................................................................................... 191 |
| Appears in Collections: | Διδακτορικές Διατριβές - ΙΑΤ |
Files in This Item:
| File | Description | Size | Format | |
|---|---|---|---|---|
| Δ.Δ. Παπανδρέου, Δ. (2025).pdf | 4.27 MB | Adobe PDF | View/Open |
This item is licensed under a Creative Commons License
