Please use this identifier to cite or link to this item:
https://olympias.lib.uoi.gr/jspui/handle/123456789/39670Full metadata record
| DC Field | Value | Language |
|---|---|---|
| dc.contributor.author | Παπανδρέου, Λάμπρος | el |
| dc.date.accessioned | 2025-12-04T13:48:12Z | - |
| dc.date.available | 2025-12-04T13:48:12Z | - |
| dc.identifier.uri | https://olympias.lib.uoi.gr/jspui/handle/123456789/39670 | - |
| dc.rights | Attribution-NonCommercial-NoDerivs 3.0 United States | * |
| dc.rights.uri | http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/3.0/us/ | * |
| dc.subject | Κύτταρα ωοθήκης | el |
| dc.subject | Ωοθυλακικό υγρό | el |
| dc.subject | Μαγνητικά νανοϋλικά | el |
| dc.subject | Ωοθυλάκια | el |
| dc.subject | Υπογονιμότητα | el |
| dc.subject | Κοκκώδη κύτταρα ωοθήκης | el |
| dc.subject | Ωοθήκες | el |
| dc.title | Ανάπτυξη πρότυπης μεθόδου απομόνωσης κοκκωδών κυττάρων από ωοθυλακικό υγρό με χρήση μαγνητικών νανοϋλικών μετά από διέγερση των ωοθηκαλίων | el |
| dc.type | masterThesis | * |
| heal.type | doctoralThesis | el |
| heal.type.en | Doctoral thesis | en |
| heal.type.el | Διδακτορική διατριβή | el |
| heal.dateAvailable | 2025-12-04T13:49:12Z | - |
| heal.access | free | el |
| heal.recordProvider | Πανεπιστήμιο Ιωαννίνων. Σχολή Επιστημών Υγείας | el |
| heal.publicationDate | 2025 | - |
| heal.abstract | Η παρούσα διδακτορική διατριβή εστιάζει στην ανάπτυξη μιας πρωτότυπης μεθόδου απομόνωσης κοκκωδών κυττάρων (GCs) από το ωοθυλακικό υγρό, χρησιμοποιώντας μαγνητικά νανοϋλικά, μετά από διέγερση των ωοθυλακίων. Η σημασία των κοκκωδών κυττάρων στην αναπαραγωγική βιολογία είναι θεμελιώδης, καθώς διαδραματίζουν κρίσιμο ρόλο στην ωρίμανση των ωαρίων, στην ορμονική ρύθμιση του αναπαραγωγικού κύκλου και στη συνολική ποιότητα των γαμετών. Η δυνατότητα αποτελεσματικής απομόνωσής τους είναι ζωτικής σημασίας τόσο για την κατανόηση των μηχανισμών της αναπαραγωγής όσο και για την κλινική αξιοποίηση των κυττάρων αυτών σε εφαρμογές υποβοηθούμενης αναπαραγωγής. Το ερευνητικό έργο βασίζεται στη χρήση μαγνητικών νανοϋλικών για την εκλεκτική απομόνωση των κοκκωδών κυττάρων. Τα νανοϋλικά αυτά συντέθηκαν και τροποποιήθηκαν κατάλληλα ώστε να επιτυγχάνουν υψηλή εκλεκτικότητα και αποδοτικότητα δέσμευσης των στόχων κυττάρων. Συγκεκριμένα, χρησιμοποιήθηκαν νανοσωματίδια οξειδίου του σιδήρου (Fe₃O₄), τα οποία επικαλύφθηκαν με διοξείδιο του πυριτίου (SiO₂) και στη συνέχεια λειτουργικοποιήθηκαν με υαλουρονικό οξύ (HA). Το υαλουρονικό οξύ επιλέχθηκε ως βιοσυμβατή και ειδική για τα κοκκώδη κύτταρα επιφάνεια προσκόλλησης, καθώς τα κύτταρα αυτά φέρουν υποδοχείς για τη συγκεκριμένη βιοπολυμερή ένωση. Για την αξιολόγηση της μεθόδου, πραγματοποιήθηκαν πειράματα φυσικοχημικού χαρακτηρισμού των νανοϋλικών με τη χρήση τεχνικών όπως η φασματοσκοπία υπερύθρου μετασχηματισμού Fourier (FTIR) και η δυναμική σκέδαση φωτός (DLS) για τον καθορισμό του μεγέθους και της επιφανειακής φορτισής των νανοσωματιδίων. Παράλληλα, εξετάστηκε η εκλεκτική δέσμευση των κοκκωδών κυττάρων μέσω κυτταρομετρίας ροής και μικροσκοπικών απεικονίσεων, επιβεβαιώνοντας την επιτυχία της προσέγγισης. Στο πειραματικό μέρος, πραγματοποιήθηκε σύγκριση της νέας μεθόδου με κλασικές τεχνικές απομόνωσης, όπως η φυγοκέντρηση διαβάθμισης πυκνότητας (Percoll/Ficoll) και η κυτταρομετρία ροής (FACS). Η νέα τεχνική εμφάνισε συγκριτικά πλεονεκτήματα, 188 καθώς οδήγησε σε αυξημένη καθαρότητα των απομονωμένων κυττάρων, διατηρώντας υψηλά επίπεδα βιωσιμότητας και μεταβολικής δραστηριότητας. Η τοξικότητα των νανοϋλικών αξιολογήθηκε μέσω δοκιμών κυτταρικής βιωσιμότητας (MTT assay), αποδεικνύοντας την ασφάλεια της χρήσης τους. Η μελέτη επικυρώθηκε μέσω επαναλαμβανόμενων πειραμάτων, ενώ η ανάλυση των αποτελεσμάτων ανέδειξε τη στατιστικά σημαντική υπεροχή της νέας μεθόδου έναντι των συμβατικών προσεγγίσεων. Η συγκριτική αξιολόγηση επιβεβαίωσε ότι η χρήση μαγνητικών νανοϋλικών προσφέρει μια καινοτόμο, αποδοτική και μη καταστρεπτική προσέγγιση για την απομόνωση κοκκωδών κυττάρων, διατηρώντας την ακεραιότητα και τη λειτουργικότητα των κυττάρων. Συμπερασματικά, η διατριβή αυτή προσφέρει μια νέα μεθοδολογική προσέγγιση στην κυτταρική απομόνωση, η οποία μπορεί να βελτιώσει τις τεχνικές αξιολόγησης της ποιότητας των γαμετών και να βρει εφαρμογή σε κλινικά πρωτόκολλα υποβοηθούμενης αναπαραγωγής. Η ανάπτυξη αυτής της τεχνολογίας ανοίγει νέες προοπτικές στη χρήση μαγνητικών νανοϋλικών στην αναπαραγωγική βιολογία, προσφέροντας ταχύτερες και αποτελεσματικότερες λύσεις στην κυτταρική απομόνωση, με δυνατότητες εφαρμογής και σε άλλους τύπους κυττάρων του αναπαραγωγικού συστήματος. | el |
| heal.abstract | This doctoral dissertation focuses on the development of an innovative method for isolating granulosa cells (GCs) from follicular fluid using magnetic nanomaterials following follicular stimulation. Granulosa cells play a crucial role in reproductive biology, contributing to oocyte maturation, hormonal regulation of the reproductive cycle, and overall gamete quality. The ability to effectively isolate these cells is of paramount importance both for understanding reproductive mechanisms and for their clinical applications in assisted reproductive technologies. The research is based on the use of magnetic nanomaterials for the selective isolation of granulosa cells. These nanomaterials were synthesized and modified to achieve high selectivity and efficient cell capture. Specifically, iron oxide (Fe₃O₄) nanoparticles were coated with silicon dioxide (SiO₂) and further functionalized with hyaluronic acid (HA). Hyaluronic acid was chosen as a biocompatible and highly specific adhesion surface for granulosa cells due to the presence of HA receptors on their surface. To evaluate the method, physicochemical characterization of the nanomaterials was performed using techniques such as Fourier-transform infrared spectroscopy (FTIR) and dynamic light scattering (DLS) to determine the size and surface charge of the nanoparticles. Additionally, selective binding of granulosa cells was assessed through flow cytometry and microscopic imaging, confirming the efficiency of the approach. In the experimental section, the new method was compared with conventional isolation techniques, such as density gradient centrifugation (Percoll/Ficoll) and fluorescence-activated cell sorting (FACS). The novel approach demonstrated significant advantages, yielding higher purity of the isolated cells while maintaining high levels of viability and metabolic activity. The cytotoxicity of the nanomaterials was evaluated using MTT viability assays, confirming their biocompatibility. The study was validated through repeated experiments, and the analysis of the results highlighted the statistically significant superiority of the new method over conventional approaches. Comparative evaluation confirmed that the use of magnetic nanomaterials 190 provides an innovative, efficient, and non-destructive approach for granulosa cell isolation while preserving their integrity and functionality. In conclusion, this dissertation presents a novel methodological approach to cell isolation that can improve gamete quality assessment techniques and be integrated into clinical protocols in assisted reproductive technologies. The development of this technology opens new prospects for the application of magnetic nanomaterials in reproductive biology, offering faster and more efficient solutions for cell isolation, with potential applications in other reproductive cell types. | en |
| heal.tableOfContents | Πίνακας περιεχομένων Πρόλογος ........................................................................................................................................ 1 Πίνακας περιεχομένων .................................................................................................................. 5 1. Εισαγωγή .................................................................................................................................. 15 1.1 Υπογονιμότητα .................................................................................................................... 15 1.1.1. Ορισμός και Ταξινόμηση της Υπογονιμότητας ........................................................... 15 1.1.2. Παράγοντες Υπογονιμότητας ...................................................................................... 18 1.1.2.1 Γυναικείος παράγοντας Υπογονιμότητας .............................................................. 18 1.1.2.2 Ανδρικός Παράγοντας Υπογονιμότητας ................................................................ 23 1.1.2.3 Γενετικοί Παράγοντες Υπογονιμότητας ................................................................. 26 1.1.2.4 Περιβαλλοντικοί Παράγοντες Υπογονιμότητας .................................................... 29 1.1.2.5 Ιδιοπαθής Υπογονιμότητα ..................................................................................... 32 1.1.3. Αξιολόγηση υπογονιμότητας – Η προσέγγιση του υπογόνιμου ζευγαριού ............... 35 1.1.3.1. Κλινική και εργαστηριακή προσέγγιση................................................................. 37 1.1.3.2. Εκτίμηση της λειτουργικότητας των ανατομικών στοιχείων της γυναίκας ......... 40 1.1.3.3. Εκτίμηση της Λειτουργικότητας των Ανατομικών Στοιχείων του Άνδρα ............. 43 1.1.4. Αντιμετώπιση της Υπογονιμότητας ............................................................................. 46 1.1.4.1. Τροποποίηση του τρόπου ζωής και συντηρητικές παρεμβάσεις ........................ 46 1.1.4.2. Φαρμακευτική αντιμετώπιση ............................................................................... 48 1.1.4.3. Χειρουργική αντιμετώπιση ................................................................................... 51 1.1.4.4. Τεχνικές υποβοηθούμενης αναπαραγωγής ......................................................... 54 1.1.5. Η διερεύνηση της γυναικείας υπογονιμότητας .......................................................... 58 1.2 Ορισμός και γενικά χαρακτηριστικά των κοκκωδών κυττάρων ......................................... 59 1.2.1 Ιστορική αναδρομή της μελέτης των κοκκωδών κυττάρων ......................................... 59 1.2.2 Σημασία των Κοκκωδών Κυττάρων στη Φυσιολογία του Θηλυκού Αναπαραγωγικού Συστήματος ........................................................................................................................... 61 1.2.2.1. Υποστήριξη της Ανάπτυξης και Ωρίμανσης των Ωοκυττάρων.............................. 62 1.2.2.2. Παραγωγή και Ρύθμιση Στεροειδών Ορμονών .................................................... 63 1.2.2.3. Ρύθμιση της Ωορρηξίας ........................................................................................ 63 1.2.2.4. Συμβολή στον Σχηματισμό και τη Διατήρηση του Ωχρού Σώματος ..................... 64 1.2.2.5. Δείκτης Ποιότητας των Ωοκυττάρων .................................................................... 65 1.2.3 Βιολογικός ρόλος και λειτουργία κοκκωδών κυττάρων .............................................. 65 1.2.3.1 Συμμετοχή των Κοκκωδών Κυττάρων στη Στήριξη και Ανάπτυξη του Ωοκυττάρου ... 65 1.2.3.2 Ενδοκρινικός και Παρακρινικός Ρόλος των Κοκκωδών Κυττάρων (Παραγωγή Ορμονών και Αυξητικών Παραγόντων) ............................................................................. 67 6 1.2.3.3 Διαφοροποίηση και Μοριακοί Μηχανισμοί Ρύθμισης των Κοκκωδών Κυττάρων68 1.2.4 Κοκκώδη Κύτταρα και Ωοθυλακική Ανάπτυξη ............................................................. 69 1.2.4.1 Ρόλος των Κοκκωδών Κυττάρων στα Διάφορα Στάδια της Ανάπτυξης του Ωοθυλακίου ....................................................................................................................... 69 1.2.4.2 Αλληλεπιδράσεις με τα Θυλακικά Κύτταρα και το Ωοκύτταρο ............................ 70 1.2.4.3 Ρυθμιστικοί Μηχανισμοί (FSH, LH, Αυξητικοί Παράγοντες) ................................. 71 1.2.5 Μεταβολικές και Μοριακές Ιδιότητες των Κοκκωδών Κυττάρων ............................... 72 1.2.5.1 Ενεργειακός μεταβολισμός και υποστήριξη του ωοκυττάρου ............................. 72 1.2.5.2 Γονιδιακή έκφραση και μοριακοί δείκτες ............................................................. 73 1.2.5.3 Σημαντικές πρωτεΐνες και σηματοδοτικά μονοπάτια ........................................... 74 1.2.6 Διαδικασία Διαφοροποίησης και Ενεργοποίησης των Προκοκκωδών Κυττάρων στην Ανάπτυξη των Ωοθυλακίων και τη Λειτουργία των Ωοθηκών. ............................................. 75 1.2.6.1 Εμβρυονικοί Προγεννήτορες ................................................................................. 75 1.2.6.2 Κυτταροκίνηση των Ωοθυλακίων .......................................................................... 76 1.2.6.3 Ενεργοποίηση Ανεξάρτητη από Γοναδοτροπίνες & Ενεργοποίηση της Ανάπτυξης .... 76 1.2.6.4 Πολλαπλασιασμός στο Προαντρικό Στάδιο .......................................................... 77 1.2.6.5 Διαφοροποίηση στο Προωρηκτικό Στάδιο ............................................................ 77 1.2.6.6 Ωοφόρα Κύτταρα και Στεροειδογένεση ................................................................ 77 1.2.6.7 Ωορρηξία και Τελική Διαφοροποίηση: Ωχρινοποίηση .......................................... 78 1.2.6.8 Γήρανση των Κοκκωδών Κυττάρων ....................................................................... 78 1.2.7 Σημασία των κοκκωδών κυττάρων στην αναπαραγωγική ιατρική .............................. 78 1.2.7.1 Ρόλος τους στην ποιότητα του ωοκυττάρου και στη γονιμοποίηση .................... 79 1.2.7.2 Συσχέτιση με τη γυναικεία γονιμότητα και τη θεραπεία υπογονιμότητας .......... 80 1.2.7.3 Δυνατότητες Εφαρμογών στη Βιοϊατρική και στην Υποβοηθούμενη Αναπαραγωγή .................................................................................................................... 81 1.2.8 Μεθοδολογικές Προσεγγίσεις για τη Μελέτη των Κοκκωδών Κυττάρων ................... 82 1.2.8.1 Κυτταρολογικές και ιστολογικές μέθοδοι ............................................................. 82 1.2.8.2 Γονιδιακή Ανάλυση και Ανάλυση Έκφρασης Γονιδίων.......................................... 84 1.2.8.3 Ανάλυση Προφίλ Πρωτεϊνών και Πρωτεομική Ανάλυση ...................................... 87 1.2.8.4 Κυτταρική καλλιέργεια και Πειράματα Κινητικότητας και Πολλαπλασιασμού ........ 90 1.2.8.5 Ανάλυση Ενδοκρινικής Δραστηριότητας και Σηματοδοτικών Μονοπατιών ......... 93 1.2.9 Τεχνικές απομόνωσης κοκκωδών κυττάρων ............................................................... 96 1.2.9.1 Μηχανική Απομόνωση (Mechanical Isolation) ...................................................... 96 1.2.9.2 Ενζυμική Απομόνωση ............................................................................................ 98 1.2.9.3 Ανάλυση με FACS ................................................................................................. 101 1.2.9.4 Μαγνητική απομόνωση ....................................................................................... 105 7 1.3 Νανοϋλικά ......................................................................................................................... 108 1.3.1 Χαρακτηριστικά νανοϋλικών ...................................................................................... 109 1.3.1 Διαχωρισμός νανοϋλικών με βάση το μέγεθος ......................................................... 112 1.3.2 Μαγνητικά νανοϋλικά ................................................................................................ 114 1.3.3 Εφαρμογές νανοϋλικών και μαγνητικών νανοϋλικών ............................................... 116 1.3.4 Νανοσωματίδια μαγνητίτη ........................................................................................ 120 2. Σκοπός της ερευνητικής εργασίας ......................................................................................... 125 3. Πειραματικό μέρος ................................................................................................................. 127 3.1 Αντιδραστήρια και διαλύτες ............................................................................................. 127 3.2 Υλικά και εξοπλισμός ........................................................................................................ 128 3.3 Πειραματικές πορείες ....................................................................................................... 129 3.3.1. Σύνθεση μαγνητικών νανοσωματιδίων Fe₃O₄ .......................................................... 129 3.3.2 Επικάλυψη μαγνητικών νανοσωματιδίων με SiO2 ..................................................... 129 3.3.3 Λειτουργικοποίηση νανοσωματιδίων με υαλουρονικό οξύ (HA) .............................. 130 3.3.5 Ασθενείς και συλλογή δειγμάτων .............................................................................. 130 3.3.6 Διαδικασία απομόνωσης κυττάρων ........................................................................... 131 3.3.7 Καταμέτρηση απομονωμένων κυττάρων .................................................................. 132 3.3.8 Καλλιέργεια κυττάρων ............................................................................................... 133 3.3.9 Βιωσιμότητα κυττάρων .............................................................................................. 133 3.3.10 Μέθοδος απομόνωσης λευκών και ερυθρών κυττάρων. ........................................ 134 3.3.11 Μέθοδος απομόνωσης κυττάρων με φικόλη. ......................................................... 135 3.3.12 Μέθοδος απομόνωσης κυττάρων με FACS. ............................................................. 136 3.3.13 Στατιστική ανάλυση .................................................................................................. 136 4. Αποτελέσματα και συζήτηση ................................................................................................. 139 4.1 Χαρακτηρισμός νανοσωματιδίων ..................................................................................... 139 4.1.1. Χαρακτηρισμός των νανοϋλικών μέσω FTIR ............................................................. 139 4.1.2. Χαρακτηρισμός του μεγέθους και του φορτίου των νανοϋλικών με DLS ................ 143 4.2 Βελτιστοποίηση μεθόδου απομόνωσης GCs .................................................................... 145 4.2.1 Βελτιστοποίηση φυγοκέντρησης και εκπλύσεων ...................................................... 145 4.2.2 Βελτιστοποίηση μοριακού βάρους ΗΑ ...................................................................... 147 4.2.3 Βελτιστοποίηση ποσότητας νανοϋλικών ................................................................... 150 4.2.4 Βελτιστοποίηση χρόνου επώασης ............................................................................. 152 4.2.5 Βελτιστοποίηση έντασης μαγνητικού πεδίου ............................................................ 154 4.2.6 Βελτιστοποίηση ποσότητας και χρόνου επώασης με υαλουρονιδάση ........................ 156 4.3 Μελέτη Εκλεκτικής δέσμευσης κυττάρων ........................................................................ 158 8 4.4 Μελέτη τοξικότητας νανοϋλικών ...................................................................................... 169 4.5 Μελέτη βιωσιμότητας απομονωμένων κυττάρων ........................................................... 172 4.6 Μελέτη μεταβολικής δραστηριότητας απομονωμένων κυττάρων .................................. 174 4.7 Επικύρωση της μεθόδου ................................................................................................... 176 4.8 Σύγκριση με υφιστάμενες μεθόδους ................................................................................ 178 5. Συμπεράσματα ....................................................................................................................... 183 6. Περίληψη ................................................................................................................................ 187 7. Abstract ................................................................................................................................... 189 8. Βιβλιογραφία ......................................................................................................................... 191 | el |
| heal.advisorName | Ζηκόπουλος, Κωνσταντίνος | el |
| heal.committeeMemberName | Ζηκόπουλος, Κωνσταντίνος | el |
| heal.committeeMemberName | Γεωργίου, Ιωάννης | el |
| heal.committeeMemberName | Μιχαηλίδης, Θεολόγος | el |
| heal.committeeMemberName | Βλεσσίδης, Αθανάσιος | el |
| heal.committeeMemberName | Σταλίκας, Κωνσταντίνος | el |
| heal.committeeMemberName | Μαραγκός, Πέτρος | el |
| heal.committeeMemberName | Σκέντου, Χαρίκλεια | el |
| heal.academicPublisher | Πανεπιστήμιο Ιωαννίνων. Σχολή Επιστημών Υγείας. Τμήμα Ιατρικής | el |
| heal.academicPublisherID | uoi | el |
| heal.numberOfPages | 209 σ. | el |
| heal.fullTextAvailability | true | - |
| Appears in Collections: | Διδακτορικές Διατριβές - ΙΑΤ | |
Files in This Item:
| File | Description | Size | Format | |
|---|---|---|---|---|
| Δ.Δ. Παπανδρέου, Δ. (2025).pdf | 4.27 MB | Adobe PDF | View/Open |
This item is licensed under a Creative Commons License
