Please use this identifier to cite or link to this item:
https://olympias.lib.uoi.gr/jspui/handle/123456789/735Full metadata record
| DC Field | Value | Language |
|---|---|---|
| dc.contributor.author | Βάσσου, Αμαλία Χ. | el |
| dc.date.accessioned | 2015-10-15T18:10:28Z | - |
| dc.date.available | 2015-10-15T18:10:28Z | - |
| dc.identifier.uri | https://olympias.lib.uoi.gr/jspui/handle/123456789/735 | - |
| dc.identifier.uri | http://dx.doi.org/10.26268/heal.uoi.640 | - |
| dc.rights | Default License | - |
| dc.rights | info:eu-repo/semantics/openAccess | * |
| dc.subject | Χρόνια λεμφοκυτταρική λευχαιμία | el |
| dc.subject | Μεθυλίωση | el |
| dc.subject | Γονίδιο V.H.L. | el |
| dc.subject | Πρωτεΐνη ZAP70 | - |
| dc.title | Ανοσοφαινοτυπική και κυτταρογενετική μελέτη στη χρόνια λεμφοκυτταρική λευχαιμία | el |
| dc.type | info:eu-repo/semantics/doctoralThesis | * |
| heal.type | doctoralThesis | - |
| heal.type.en | Doctoral thesis | en |
| heal.type.el | Διδακτορική διατριβή | el |
| heal.secondaryTitle | η συμβολή τους στην πρόγνωση της νόσου | el |
| heal.classification | Λευχαιμία | el |
| heal.identifier.secondary | http://thesis.ekt.gr/thesisBookReader/id/19854#page/1/mode/2up | - |
| heal.language | el | - |
| heal.access | free | - |
| heal.recordProvider | Πανεπιστήμιο Ιωαννίνων. Σχολή Ιατρικής. Τμήμα Ιατρικής. Τομέας Παθολογικός. Κλινική Αιματολογική | el |
| heal.publicationDate | 2010 | - |
| heal.bibliographicCitation | Βιβλιογραφία: 153-188 σ. | el |
| heal.abstract | Η Χρόνια Λεμφοκυτταρική Λευχαιμία (ΧΛΛ) είναι κακοήθης κλωνική αιματολογική διαταραχή που χαρακτηρίζεται από τη συσσώρευση μικρών, ώριμων στην εμφάνιση CD5+ λεμφοκυττάρων, στο αίμα, στο μυελό των οστών, στους λεμφαδένες, στο ήπαρ και στο σπλήνα. Αποτέλεσμα αυτής της διαδικασίας είναι η λεμφαδενοπάθεια, η οργανομεγαλία, οι κυτταροπενίες και η ανοσολογική δυσπραγία. Η ΧΛΛ είναι η συχνότερη λευχαιμία των ενηλίκων στο δυτικό ημισφαίριο. Μολονότι η νόσος αφορά κυρίως ηλικιωμένους, δεν πρέπει να παραβλέπεται το γεγονός ότι το 30% των προσβεβλημένων ασθενών έχει ηλικία κάτω των 55 ετών. Η πρόγνωση της νόσου είναι εξαιρετικά ετερογενής, με διάμεση επιβίωση που κυμαίνεται από λίγους μήνες ως δεκαετίες. Τα κλινικοπαθολογικά συστήματα ταξινόμησης προβλέπουν τη βιολογική συμπεριφορά της νόσου μόνο μερικώς. Οι προγνωστικοί παράγοντες περιλαμβάνουν κυρίως την παρουσία κυτταρογενετικών ανωμαλιών, την παρουσία ή μη σωματικών μεταλλάξεων στη μεταβλητή περιοχή του γονιδίου της βαρειάς αλύσου των ανοσοσφαιρινών IgVH, την έκφραση της ZAP-70 πρωτεΐνης από τα κλωνικά Β- λεμφοκύτταρα και πληθώρα άλλων παραγόντων. Στην παρούσα διατριβή επιχειρείται η μελέτη της ανοσοϊστοχημικής έκφρασης της ZAP-70 πρωτεΐνης και η μελέτη μοριακών παραμέτρων όπως: η κατάσταση μεθυλίωσης του υποκινητή του γονιδίου VHL και το πρότυπο μεθυλίωσης της DMR ρυθμιστικής περιοχής που περιλαμβάνει τον υποκινητή του γονιδίου DLK1/MEG3, που είναι γονίδιο υποκείμενο στο μηχανισμό της γονιδιωματικής αποτύπωσης. Ερευνήθηκε έαν οι παραπάνω παράμετροι είναι δυνητικά προγνωστικοί παράγοντες της νόσου και μελετήθηκαν οι στατιστικές τους συσχετίσεις με τα κλινικοεργαστηριακά χαρακτηριστικά της νόσου. Η ανίχνευση της μεθυλίωσης των υπό μελέτη γονιδίων έγινε σε γενωμικό DNA που απομονώθηκε από ορό και από τομές οστεομυελικής βιοψίας. Ο ορός επιλέχθηκε γιατί συνδυάζει απλή και εύκολη λήψη και γιατί σύμφωνα με τα βιβλιογραφικά δεδομένα είναι πολύτιμη πηγή ελεύθερου νεοπλασματικού DNA. Μέθοδοι Γενωμικό DNA απομονώθηκε από δείγματα ορού και δείγματα οστεομυελικής βιοψίας από 41 ασθενείς με ΧΛΛ. Για την απομόνωση γενωμικού DNA από δείγματα ορών, χρησιμοποιήθηκε το QIAamp DNA mini kit (Qiagen) και στην απομόνωση του γενωμικού DNA από βιοψίες μυελού των οστών σε τομές παραφίνης, χρησιμοποιήθηκε η ίδια μέθοδος με ορισμένες τροποποιήσεις. Η μελέτη της μεθυλίωσης των υποκηνιτών των υπό μελέτη γονιδίων (VHL και MEG3) έγινε με την τεχνική της ειδικής της μεθυλίωσης αντίδρασης PCR (Μethylation-specific PCR - MSP). Αρχικά το DNA υπέστη χημική κατεργασία με NaHSO3, χρησιμοποιήθηκε το EZ DNA MethylationTM kit (Zymo Research, USA). Για την αντίδραση MSP χρησιμοποιήθηκε το HotStarTaq Master Mix kit της Qiagen. Η PCR αντίδραση έλαβε χώρα σε τελικό όγκο 25μl, που περιείχε: HotStarTaq Master Mix (τελική συγκέντρωση 1Χ PCR buffer, 2.5 μονάδες HotStarTaq DNA πολυμεράση, 200Μm καθενός dNTP και 1.5mM MgCl2), 0.4μΜ των κατάλληλων εκκινητών και 30ng χημικά τροποποιημένου DNA. Για κάθε αντίδραση PCR παράλληλα με τα υπό μελέτη δείγματα εξετάζονταν και ένα δείγμα χωρίς DNA που λειτουργούσε ως τυφλό και ως θετικός μάρτυρας χρησιμοποιήθηκε ολικά μεθυλιωμένο DNA, που διατίθεται στο εμπόριο. Η παρουσία των προϊόντων της PCR αντίδρασης ανιχνεύθηκε με οριζόντια ηλεκτροφόρηση σε πηκτή αγαρόζης 2,5%. Η ανοσοϊστοχημική μελέτη των οστεομυελικών βιοψιών έγινε με την κλασσική τεχνική στρεπταβιδίνης-βιοτίνης. Τo μονοκλωνικό αντίσωμα που χρησιμοποιήθηκε για την ανίχνευση της κυτταροπλασματικής έκφρασης του ZAP-70 ήταν το 2F3.2 mouse (Cell Marque). Επίσης, ελέγχθηκε η ανοσοϊστοχημική έκφραση των CD3, CD20, CD5 και CD23. Λόγω του μικρού μεγέθους του δείγματος των ασθενών (41), ο έλεγχος για την ύπαρξη συσχετίσεων μεταξύ παραμέτρων έγινε τόσο με τη μέθοδο Pearson όσο και με τη μέθοδο Spearmann. Η περιγραφική μελέτη των μεταβολών μιας μελετόμενης παραμέτρου σε συνάρτηση με άλλη παράμετρο έγινε με την κατασκευή πινάκων συνάφειας και με την εφαρμογή του Chi-square test (χ2). Ο προσδιορισμός της ολικής επιβίωσης έγινε από την ημερομηνία διάγνωσης ως τον θάνατο ή την τελευταία επίσκεψη του ασθενούς με τη μέθοδο Kaplan-Meier | - |
| heal.advisorName | - | - |
| heal.committeeMemberName | Μπουραντάς, Κωνσταντίνος | el |
| heal.committeeMemberName | Μπάη, Μαρία | - |
| heal.committeeMemberName | Γεωργίου, Ιωάννης | - |
| heal.committeeMemberName | Ανδρονίκου, Στυλιανή | - |
| heal.committeeMemberName | Μπερής, Αλέξανδρος | - |
| heal.committeeMemberName | Μακρυδήμας, Γεώργιος | - |
| heal.committeeMemberName | Καψάλη, Ελένη | - |
| heal.academicPublisher | Πανεπιστήμιο Ιωαννίνων. Σχολή Ιατρικής. Τμήμα Ιατρικής. Τομέας Παθολογικός. Κλινική Αιματολογική | el |
| heal.academicPublisherID | uoi | - |
| heal.numberOfPages | 198 σ. | - |
| heal.fullTextAvailability | false | - |
| Appears in Collections: | Διδακτορικές Διατριβές - ΙΑΤ | |
Files in This Item:
| File | Description | Size | Format | |
|---|---|---|---|---|
| Δ.Δ. ΒΑΣΣΟΥ ΑΜΑΛΙΑ 2010.pdf | 7.14 MB | Adobe PDF | View/Open |
This item is licensed under a Creative Commons License
