Please use this identifier to cite or link to this item:
https://olympias.lib.uoi.gr/jspui/handle/123456789/39722Full metadata record
| DC Field | Value | Language |
|---|---|---|
| dc.contributor.author | Κούτουλας, Δημήτριος | el |
| dc.date.accessioned | 2026-01-15T16:45:34Z | - |
| dc.date.available | 2026-01-15T16:45:34Z | - |
| dc.identifier.uri | https://olympias.lib.uoi.gr/jspui/handle/123456789/39722 | - |
| dc.rights | CC0 1.0 Universal | * |
| dc.rights.uri | http://creativecommons.org/publicdomain/zero/1.0/ | * |
| dc.subject | Δομική Βιοχημεία | el |
| dc.subject | Κρυσταλλογραφία πρωτεϊνών | el |
| dc.subject | Ιικές πρωτεΐνες | el |
| dc.subject | Ινσουλίνη | el |
| dc.title | Δομική και λειτουργική ανάλυση ιικών πρωτεϊνών και φαρμακευτικών στόχων | el |
| dc.type | masterThesis | en |
| heal.type | masterThesis | el |
| heal.type.en | Master thesis | en |
| heal.type.el | Μεταπτυχιακή εργασία | el |
| heal.classification | Ανόργανη Βιολογική Χημεία | el |
| heal.dateAvailable | 2026-01-15T16:46:34Z | - |
| heal.language | el | el |
| heal.access | free | el |
| heal.recordProvider | Πανεπιστήμιο Ιωαννίνων, Σχολή Θετικών Επιστημών | el |
| heal.publicationDate | 2025-11-14 | - |
| heal.abstract | Η παρούσα εργασία πραγματεύεται τη δομική μελέτη βιολογικών μακρομορίων με φαρμακευτικό ενδιαφέρον, με κύριους άξονες την ανθρώπινη ινσουλίνη και επιλεγμένες ιικές πρωτεΐνες. Κεντρική μεθοδολογική προσέγγιση συνιστά η μέθοδος κρυσταλλογραφίας ακτίνων Χ, με στόχο τη διερεύνηση της σχέσης μεταξύ δομής και λειτουργίας, καθώς επίσης τη συνεισφορά στον ορθολογικό σχεδιασμό και στη βελτιστοποίηση φαρμακευτικών σκευασμάτων. Στο πλαίσιο μελέτης των φαρμακευτικών μορίων πραγματοποιήθηκε κρυσταλλογραφική μελέτης της ανθρώπινης ινσουλίνης σε σύμπλοκο με τον προσδέτη 4-βρωμορεσορσινόλη υπό μεταβαλλόμενες συνθήκες φυσικοχημικού περιβάλλοντος. Σε πρώτο επίπεδο, μελετήθηκε ο πολυμορφισμός του αναφερόμενου ινσουλινικού συμπλόκου συναρτήσει του pH, αξιοποιώντας την τεχνική περίθλασης ακτίνων Χ από πολυκρυσταλλικό δείγμα (X-ray Powder Diffraction, XRPD). Η ανάλυση των δεδομένων περίθλασης ανέδειξε την παρουσία πολυμόρφων μονοκλινούς συμμετρίας χαρακτηριζόμενη από τα space groups P21(γ), P21(δ) και P21(β), επιβεβαιώνοντας παλαιότερα ευρήματα (Σπηλιοπούλου, 2023). Σε δεύτερο επίπεδο, διεξήχθη κρυσταλλογραφική μελέτη του πολυμόρφου P21(β) του συμπλόκου της ανθρώπινης ινσουλίνης με την 4-βρωμορεσορσινόλη, μέσω in-situ XRPD μετρήσεων υπο μεταβαλλόμενες συνθήκες σχετικής υγρασίας. Το δείγμα υποβλήθηκε σε επαναλαμβανόμενους κύκλους αφυδάτωσης-ενυδάτωσης, διατηρώντας την κρυσταλλικότητα του έως 50% RH, με τις μεταβολές που υφίστανται οι παράμετροι της μοναδιαίας κυψελίδας να είναι σχετικά αναστρέψιμες. Στο πλαίσιο μελέτης των ιικών πρωτεϊνών, εκπονήθηκε δομική μελέτη της πρωτεάσης 3C (3Cpro) του ιού Coxsackie B3 με στόχο τη βελτίωση των δεδομένων XRPD. Κατόπιν επιτυχούς υπερέκφρασης και απομόνωσης της 3Cpro, πραγματοποιήθηκαν δοκιμές βελτιστοποίησης των συνθηκών κρυστάλλωσης της πρωτεΐνης με την αξιοποίηση της τεχνικής της σποράς. Η ανάλυση των δεδομένων XRPD ανέδειξε την παρουσία του πολυμόρφου C2, το οποίο έχει επισημανθεί επίσης σε πρότερες μελέτες (Fili et al., 2016), ενώ μια πρώτη σύγκριση των δεδομένων υποδεικνύει βελτίωση της ποιότητας των δεδομένων περίθλασης. Παράλληλα, διεξήχθη μελέτη της 3’-5’ εξωνουκλεάσης του ιού της λεμφοκυτταρικής χοριομηνιγγίτιδας. Η επιτυχής έκφραση και απομόνωση της εξωνουκλεάσης επέτρεψε την πραγματοποίηση δοκιμών κρυστάλλωσης και συγκεκριμένα τη βελτιστοποίηση της αρχικής συνθήκης που απέδωσε το δομικό μοντέλο 8cnl (Σπηλιοπούλου, 2023), αξιοποιώντας την τεχνική της σποράς. Τα πρώτα αποτελέσματα καταδεικνύουν ότι η τεχνική της σποράς συμβάλλει σημαντικά στην επίτευξη κρυσταλλικού αποτελέσματος, ενώ επερχόμενα πειράματα περίθλασης ακτίνων Χ αναμένεται να αποσαφηνίσουν την ποιότητα των κρυστάλλων. | el |
| heal.abstract | The present thesis focuses on the structural investigation of biologically and pharmaceutically macromolecules, with emphasis on human insulin and selected vital proteins. The central methodological approach is X-ray crystallography, aiming to elucidate the relationship between structure and function and to contribute to the rational design and optimization of pharmaceutical formulations. In the framework of pharmaceutical molecules’ study, crystallographic investigation of human insulin – 4-bromoresorcinol complex was carried out under varying physicochemical environment. At a fist level, the polymorphism of the complex was examined as a function of pH via X- ray Powder Diffraction (XRPD). Data analysis revealed the presence of monoclinic polymorphs corresponding to the space groups P21(γ), P21(δ) and P21(β), in agreement with previous findings (Σπηλιοπούλου, 2023). At a second level, crystallographic study of the P21(β) polymorph of human insulin – 4-bromoresorcinol complex was conducted through in-situ XRPD measurements under varying relative humidity conditions. The sample sustained successive dehydration-rehydration cycles, maintaining crystallinity up to 50% RH, while the unit cell parameters’ variations observed during the process were found to be partially reversible. Within the study of viral protein, a structural investigation of the 3 C protease (3Cpro) of Coxsackie B3 virus was performed, aiming to improve XRPD data quality. Following successful overexpression and purification of 3Cpro, crystallization optimization trials were conducted using seeding technique. Diffraction analysis confirmed the presence of C2 polymorph, consistent with previous reports (Fili et al., 2016), while initial comparison of data indicates enhanced diffraction quality. Additionally, the 3’-5’ exonuclease domain of the Lymphocytic Choriomeningitis Virus (LCMV) was structurally investigated. Successful expression and purification of exonuclease enabled optimization of the crystallization condition that previously yielded to the structural model 8cnl (Σπηλιοπούλου, 2023), again employing the seeding technique. Preliminary results suggest that seeding significantly facilitates crystal formation, while upcoming X-ray diffraction experiments are expected to determine the final crystal quality. | en |
| heal.advisorName | Μαργιωλάκη, Ειρήνη | el |
| heal.committeeMemberName | Μαργιωλάκη, Ειρήνη | el |
| heal.committeeMemberName | Περλεπές, Σπυρίδων | el |
| heal.committeeMemberName | Σταματάτος, Θεοχάρης | el |
| heal.academicPublisher | Πανεπιστήμιο Ιωαννίνων. Σχολή Θετικών Επιστημών. Τμήμα Χημείας | el |
| heal.academicPublisherID | uoi | el |
| heal.numberOfPages | 118 | el |
| heal.fullTextAvailability | true | - |
| Appears in Collections: | Διατριβές Μεταπτυχιακής Έρευνας (Masters) - ΧΗΜ | |
Files in This Item:
| File | Description | Size | Format | |
|---|---|---|---|---|
| Μ.Ε. Κούτουλας Δημήτριος (2025).pdf | 7.77 MB | Adobe PDF | View/Open |
This item is licensed under a Creative Commons License
