Please use this identifier to cite or link to this item:
https://olympias.lib.uoi.gr/jspui/handle/123456789/33552Full metadata record
| DC Field | Value | Language |
|---|---|---|
| dc.contributor.author | Λέντζαρης, Παναγιώτης | el |
| dc.contributor.author | Lentzaris, Panagiotis | en |
| dc.date.accessioned | 2024-02-02T07:10:19Z | - |
| dc.identifier.uri | https://olympias.lib.uoi.gr/jspui/handle/123456789/33552 | - |
| dc.identifier.uri | http://dx.doi.org/10.26268/heal.uoi.13268 | - |
| dc.rights | Attribution-NonCommercial-NoDerivs 3.0 United States | * |
| dc.rights.uri | http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/3.0/us/ | * |
| dc.subject | Αγγειακό ενδοθήλιο | el |
| dc.subject | Εκκριτικό μονοπάτι | el |
| dc.subject | Εκκριτικά κυστίδια | el |
| dc.subject | Μη συμβατική έκκριση | el |
| dc.subject | Γαλεκτίνες | el |
| dc.subject | Vascular endothelium | en |
| dc.subject | Secretory pathway | en |
| dc.subject | Secretory vesicles | en |
| dc.subject | Unconventional secretion | en |
| dc.subject | Galectins | en |
| dc.title | Μελέτη της διακίνησης της Γαλεκτίνης-1, μιας μη συμβατικά εκκρινόμενης πρωτεΐνης | el |
| dc.title | Study of the trafficking of Galectin-1, an unconventionally secreted protein | en |
| dc.type | masterThesis | en |
| heal.type | masterThesis | el |
| heal.type.en | Master thesis | en |
| heal.type.el | Μεταπτυχιακή εργασία | el |
| heal.classification | Μοριακή κυτταρική βιολογία | el |
| heal.classification | Molecular cell biology | en |
| heal.dateAvailable | 2027-02-01T22:00:00Z | - |
| heal.language | en | el |
| heal.access | embargo | el |
| heal.recordProvider | Πανεπιστήμιο Ιωαννίνων. Σχολή Επιστημών Υγείας | el |
| heal.publicationDate | 2024 | - |
| heal.abstract | Η δυσλειτουργία του αγγειακού ενδοθηλίου εμπλέκεται στις πιο απειλητικές για τη ζωή ασθένειες, όπως είναι τα καρδιαγγειακά και φλεγμονώδη νοσήματα, καθώς και η καρκινική αγγειογένεση. Βιοδραστικά μόρια που σχετίζονται με τις παραπάνω ασθένειες και εκκρίνονται από τα ενδοθηλιακά κύτταρα, αρχικά αποθηκεύονται σε κυτταροειδικά εκκριτικά κυστίδια, τα επονομαζόμενα «Weibel-Palade bodies» (WPBs). Μέχρι σήμερα, έχει ταυτοποιηθεί μόνο ένα μέρος των πρωτεϊνών που απελευθερώνονται από τα WPBs. Για αυτό σε προηγούμενη έρευνα στο εργαστήριό μας, πραγματοποιήθηκε πρωτεομική ανάλυση στο υλικό που εκκρίνεται από ενεργοποιημένα ενδοθηλιακά κύτταρα (HUVEC). Προς έκπληξή μας, μεταξύ των νέων πρωτεϊνών που ταυτοποιήθηκαν, βρέθηκε και η πρωτεΐνη galectin-1 (Gal-1), η οποία είναι μια μη συμβατικά εκκρινόμενη πρωτεΐνη, με τον ακριβή μηχανισμό εξωκυττάρωσής της να μην είναι ακόμα γνωστός. Επιπλέον, αδημοσίευτα δεδομένα του εργαστηρίου έδειξαν ότι η Gal-1 εντοπίζεται σε ένα υποσύνολο των WPBs και σε περιορισμένο αριθμό κυττάρων HUVE. Ο εντοπισμός της Gal-1 στα WPBs γεννά πολλά ενδιαφέροντα ερωτήματα. Αρχικά, στην παρούσα μελέτη θελήσαμε να διερευνήσουμε την ακριβή τοπολογία της Gal-1 στα WPBs. Ειδικότερα, δεδομένου ότι η Gal-1 είναι μια κυτταροπλασματική πρωτεΐνη, θεωρήσαμε σημαντικό να διερευνήσουμε αν η Gal-1 απλά αγκυροβολείται στην μεμβράνη των WPBs προς την κυτταροπλασματική τους πλευρά ή αν εισέρχεται στον αυλό των κυστιδίων. Η απάντηση του συγκεκριμένου ερωτήματος θα δώσει σημαντικές πληροφορίες για τη λειτουργία της Gal-1 στα συγκεκριμένα κυστίδια και την επακόλουθη πορεία της, μετά την επαγόμενη από προσδέτη εξωκυττάρωση των κυστιδίων. Για την ακριβή τοπολογία, εξαιτίας της πολύ μικρής διαμέτρου των WPBs (100-300 nm) η οποία είναι σημαντικά μικρότερη από το διακριτικό όριο της συνεστιακής μικροσκοπίας (500nm), και άρα δεν επιτρέπει τη διάκριση μεταξύ της μεμβράνης και του αυλού των WPBs, τροποποιήσαμε το pH των κυστιδίων, κάτι που αυξάνει την διάμετρό τους, αφού μεταβάλλει το σχήμα τους από επίμηκες σε σφαιρικό, επιτρέποντας τελικά τον διαχωρισμό της μεμβράνης από τον αυλό. Υπό αυτές τις συνθήκες, πραγματοποιήσαμε τριπλή χρώση ανοσοφθορισμού για τον ενδογενή VWF (το κύριο πρωτεϊνικό φορτίο αυλού των WPBs), την EGFP-Rab27a (ένας μεμβρανικός δείκτης των κυστιδίων) και την ενδογενή Gal-1. Η ανάλυση αυτή οδήγησε στο πολύ ενδιαφέρον εύρημα, πως η Gal-1 αποθηκεύεται στον αυλό των WPBs. Επιπλέον, επιβεβαιώσαμε δεδομένα του εργαστηρίου από προηγούμενη έρευνα, ότι δηλαδή η Gal-1 αποθηκεύεται σε ένα υποσύνολο των WPBs και σε περιορισμένο αριθμό κυττάρων HUVE. Επίσης παρατηρήσαμε πως συχνά η Gal-1 αποθηκεύεται σε WPBs περίεργου (μη επίμηκους) σχήματος, τα οποία πιθανόν έχουν προκύψει από ομοτυπική σύντηξη μεταξύ ανεξάρτητων κυστιδίων. Αυτές οι παρατηρήσεις μας οδήγησαν στο να μελετήσουμε τις συνθήκες που επάγουν την είσοδο της Gal-1 στα WPBs. Βρήκαμε πως συσσώρευση των κυστιδίων στην περιφέρεια του κυττάρου, όπως συμβαίνει κατά την καλλιέργεια των κυττάρων σε συνθήκες υψηλής πυκνότητας (over-confluent cell culture conditions) ή κατά την κυτταρική μετανάστευση (cell migration), αυξάνει σημαντικά τον αριθμό των κυστιδίων που αποθηκεύουν την πρωτεΐνη Gal-1. Η αύξηση αυτή θα μπορούσε να οφείλεται σε ατελή ομοτυπική σύντηξη μεταξύ των κυστιδίων, κάτι που επάγεται από την υψηλή πυκνότητά τους. Τα δεδομένα αυτά καταδεικνύουν πως η Gal-1 εισέρχεται στα κυστίδια πιθανώς λόγω καταστροφής της μεμβράνης των κυστιδίων, ένας μηχανισμός εξωκυττάρωσης που έχει προταθεί βιβλιογραφικά για άλλους τύπους κυστιδίων από μη συμβατικά εκκρινόμενες πρωτεΐνες. Η σύνδεση της Gal-1 σε γλυκοζυλιωμένες πρωτεΐνες που βρίσκονται στον αυλό των WPBs θα μπορούσε να είναι μηχανισμός ρύθμισης της δράσης των εκκρινόμενων μορίων, ελέγχοντας με τον τρόπο αυτόν την προθρομβωτική, προφλεγμονώδη και αγγειογενετική δραστικότητα των εκκρινόμενων από τα κυστίδια, πρωτεϊνών. | el |
| heal.abstract | Vascular endothelial dysfunction is implicated in the most life-threatening diseases, such as cardiovascular and inflammatory diseases, as well as cancer angiogenesis. Critical molecules in these diseases are derived from endothelial cells and are stored in Weibel Palade bodies (WPBs), which are endothelial specialized secretory organelles. To date, only a part of the WPBs-released proteins has been identified. Thus, previous work from our laboratory performed proteomic analysis on activated endothelial cells (HUVEC). Strikingly, among the new proteins identified was the protein galectin-1 (Gal-1), which is an unconventionally secreted protein, whose exact mechanism of exocytosis is not yet known. Unpublished work from our group showed that Gal-1 is localized in a sub-population of cells, in a sub-group of WPBs. The localization of Gal-1 in WPBs sparks interesting questions. Firstly, we asked what is the precise topology of Gal-1 within the secretory WPBs. Given that Gal-1 is a cytoplasmic protein, it is critical to assess whether Gal-1 is simply docked at the cytoplasmic surface of WPBs, or it enters the lumen of these organelles. Addressing this question, would yield significant insights into the possible function of Gal-1 within these vesicles and its subsequent fate upon ligand-induced exocytosis. To address the exact topology, due to the exceptionally diminutive diameter of the WPBs (100-300 nm) which is lower than the optical resolution of confocal microscopy (500 nm), we altered the pH of the vesicles, which increases their diameter by inducing their rounding and thereby allowing us to resolve between the lumen and the membrane of the vesicle. Under these conditions, we performed triple immunofluorescence staining for endogenous VWF (the main lumenal cargo protein), EGFP-Rab27a (a membrane marker of these vesicles) and endogenous Gal-1. Intriguingly, we found that Gal-1 is stored within the lumen of WPBs. Furthermore, we confirmed previous lab findings that Gal-1 is stored in a sub-population of WPBs, in subset of cells. In often cases, Gal-1 positive bodies exhibited irregular shape, suggesting that they may arise from homotypic fusion between independent bodies. These observations prompted us to explore the conditions that trigger Gal-1 entry into these cellular compartments. We found that accumulation of vesicles in the periphery of the cell, as occurs during over-confluent cell culture conditions or during cell migration, leads to a significant increase in Gal-1 positive WPBs. The increase in Gal-1 positive WPBs could be due to leaky homotypic fusion of vesicles, which is induced by their high density. This suggests that Gal-1 entry into vesicles is possibly due to damage to their membrane, a mechanism of exocytosis that has been suggested in the literature for other types of vesicles by unconventionally secreted proteins. Binding of Gal-1 to glycosylated cargo proteins in the lumen of WPBs could be a mechanism regulating the activity of secreted molecules, thereby controlling the prothrombotic, proinflammatory and angiogenic activity of secreted cargo. | en |
| heal.advisorName | Χριστοφορίδης, Σάββας | el |
| heal.committeeMemberName | Χριστοφορίδης, Σάββας | el |
| heal.committeeMemberName | Φριλίγγος, Ευστάθιος | el |
| heal.committeeMemberName | Λιακόπουλος, Δημήτριος | el |
| heal.committeeMemberName | Παπαμαρκάκη, Θωμαΐς | el |
| heal.committeeMemberName | Γεωργιάδου, Μαρία | el |
| heal.academicPublisher | Πανεπιστήμιο Ιωαννίνων. Σχολή Επιστημών Υγείας. Τμήμα Ιατρικής | el |
| heal.academicPublisherID | uoi | el |
| heal.numberOfPages | 81 σ. | el |
| heal.fullTextAvailability | true | - |
| Appears in Collections: | Διατριβές Μεταπτυχιακής Έρευνας (Masters) - ΙΑΤ | |
Files in This Item:
| File | Description | Size | Format | |
|---|---|---|---|---|
| Μ.Ε. Λέντζαρης Παναγιώτης (2024).pdf | 12.43 MB | Adobe PDF | View/Open Request a copy |
This item is licensed under a Creative Commons License
