Please use this identifier to cite or link to this item:
https://olympias.lib.uoi.gr/jspui/handle/123456789/32968| Title: | Ο ρόλος της PCSK9 στην αθηροθρόμβωση The role of PCSK9 in atherothrombosis |
| Institution and School/Department of submitter: | Πανεπιστήμιο Ιωαννίνων. Σχολή Θετικών Επιστημών |
| Subject classification: | Χημεία Ιατρική Βιοχημεία |
| Keywords: | Αθηροσκλήρωση,Αθηροθρόμβωση,PCSK9,Ανθρώπινα ενδοθηλιακά κύτταρα ομφάλιου λώρου,Αιμοπετάλια,Υψηλής πυκνότητας λιποπρωτεΐνη,Χαμηλής πυκνότητας λιποπρωτεΐνη,Υπερχοληστερολαιμία,Μονοκλωνικά αντισώματα έναντι της PCSK9,Φλεγμονή |
| URI: | https://olympias.lib.uoi.gr/jspui/handle/123456789/32968 http://dx.doi.org/10.26268/heal.uoi.12767 |
| Table of contents: | Περιεχόμενα Σκοπός της Διατριβής 14 1ο Κεφάλαιο – Αθηροθρόμβωση 17 1.1 Εισαγωγή 17 1.2 Αιμοπετάλια 17 1.2.1 Δομή των αιμοπεταλίων 18 1.2.1.1 Περιφερική ζώνη 18 1.2.1.2 Κυτοσόλιο 19 1.2.1.3 Ζώνη των οργανιδίων 19 1.2.1.4 Συστήματα μεμβρανών 21 1.3 Υποδοχείς των αιμοπεταλίων και οι αγωνιστές τους 21 1.3.1 Υποδοχείς των αιμοπεταλίων 21 1.3.1.1 Υποδοχείς προσκόλλησης 22 1.3.1.1.2 Υποδοχέας GPVI 22 1.3.1.1.3 Υποδοχέας GPIa/IIa 23 1.3.1.1.4 Υποδοχέας GPIb/IX/V 24 1.3.1.2 Πουρινεργικοί υποδοχείς 24 1.3.1.3 Υποδοχείς του θρομβοξανίου Α2 26 1.3.1.4. Υποδοχέας GPIIb/IIIa 27 1.3.1.5. Υποδοχείς ενεργοποιούμενοι από πρωτεάσες 28 1.4 Προσκόλληση, Ενεργοποίηση και Συσσώρευση Αιμοπεταλίων 29 1.5 Ενδοθήλιο 32 1.5.1 Χαρακτηρισμός, ταυτοποίηση και ταξινόμηση των EPCs 33 1.5.2. Τα EPCs στην αθηροσκλήρωση 37 1.5.3 Τα EPCs στην αγγειογένεση 38 1.5.4 Τα EPCs στην αναγέννηση του ενδοθηλίου 40 1.5.5. Αλληλεπιδράσεις μεταξύ αιμοπεταλίων και των EPCs 41 1.5.6 Αλληλεπιδράσεις μεταξύ των αιμοπεταλίων και των πρόδρομων CD34+ κυττάρων 42 1.6. Λιποπρωτεΐνες 43 1.6.1 HDL λιποπρωτεΐνη 45 1.6.2 LDL λιποπρωτεΐνη 46 1.6.3 Λιποπρωτεϊνικοί Υποδοχείς 47 1.7 Αντιαιμοπεταλιακή αγωγή 50 1.7.1. Αναστολείς της COX-1 51 1.7.2 Ανταγωνιστές του υποδοχέα P2Y12 53 1.7.3 Ανταγωνιστές των PARs 55 1.8 Υπολιπιδαιμική αγωγή 57 1.8.1 Στατίνες 57 1.8.2 Φιμπράτες 58 2ο Κεφάλαιο ~ Proprotein Convertases 59 2.1 Εισαγωγή 59 2.2 PCSK9 ~Εισαγωγή 61 2.3 Βιοχημεία και Μοριακή Βιολογία της PCSK9 62 2.4 Αλληλεπιδράσεις της PCSK9 με λιποπρωτεΐνες 64 2.4.1 Αλληλεπιδράσεις της PCSK9 με την LDL λιποπρωτεΐνη 64 2.4.2 Αλληλεπιδράσεις της PCSK9 με λιποπρωτεΐνες πλούσιες σε τριγλυκερίδια 66 2.4.3 Αλληλεπιδράσεις της PCSK9 με την Lp(a) 66 2.4.4 Αλληλεπιδράσεις της PCSK9 με την HDL λιποπρωτεΐνη 67 2.5 Θεραπείες που στοχεύουν την PCSK9 67 2.5.1. Αναστολείς της σύνδεσης της PCSK9 με τον υποδοχέα της LDL 68 2.5.1.1. Μονοκλωνικά αντισώματα έναντι της PCSK9 68 2.5.1.2. Εμβόλια έναντι της PCSK9 70 2.5.1.3. Μιμητικά πεπτίδια έναντι της PCSK9 71 2.5.1.4. Αδνεκτίνες 71 2.5.1.5. Ανεξίνη Α2 72 2.5.2. Αναστολείς της έκφρασης της PCSK9 72 2.5.2.1 siRNA για τη σίγαση του γονιδίου της ηπατικής PCSK9 72 2.5.2.2 Ολιγονουκλεοτίδια έναντι του mRNA της PCSK9 (Antisense Oligonucleotides) 73 2.5.2.3 Χρησιμότητα της τεχνολογίας CRISPR/Cas9 στην τροποποίηση του γονιδιώματος της PCSK9 74 2.5.3. Αναστολείς της έκκρισης της PCSK9 75 2.5.4 Πλειοτροπικές δράσεις της αναστολής της PCSK9 76 2.6 Ο ρόλος της PCSK9 στην αθηροσκλήρωση και τη θρόμβωση 76 3ο Κεφάλαιο ~Υλικά και Μέθοδοι 80 3.1 Απομόνωση Λιποπρωτεϊνών με τη μέθοδο των διαδοχικών υπερφυγοκεντρήσεων 81 3.1.1. Καταβύθιση των ApoB- Λιποπρωτεϊνών 85 3.2 Προσδιορισμός πρωτεϊνών με τη μέθοδο BCA 86 3.3 Ενζυμικός Φωτομετρικός Προσδιορισμός Ολικής Χοληστερόλης 88 3.4 Μελέτη της καθαρότητας των απομονωμένων λιποπρωτεϊνών καθώς και του απεμπλουτισμένου από ApoB- λιποπρωτεϊνών υπερκειμένου με ηλεκτροφόρηση των δειγμάτων 90 3.5 Συσσωρευομετρία Οπτικής Διαπερατότητας (Light Transmittance Aggregometry) 93 3.5.1. Παρασκευή πλάσματος πλούσιου σε αιμοπετάλια (Platelet-Rich Plasma, PRP) 94 3.5.2 Παρασκευή πλυμένων αιμοπεταλίων κατά Mustard 97 3.5.2.1. Λύση πλυμένων αιμοπεταλίων 100 3.5.3 Ρύθμιση και χρήση του οργάνου 101 3.6 Κυτταρομετρία Ροής (Flow Cytometry) 103 3.6.1. Έλεγχος της εμφάνισης του ενδοθηλιακού φαινότυπου στα CD34+ πρόδρομα κύτταρα καθώς και στην αλληλεπίδραση των αιμοπεταλίων με τα CD34+ και CD34+/KDR+ κύτταρα. 104 3.6.2 Έλεγχος ενεργοποίησης αιμοπεταλίων με έκφραση της P-σελεκτίνης και του CD40L. 106 3.6.3 Πειραματική Πορεία-Ρύθμιση του οργάνου 107 3.7 Κυτταρική Καλλιέργεια Ενδοθηλιακών Κυττάρων Ομφάλιου Λώρου 108 3.7.1 Πειραματική Πορεία- Μελέτη της επίδρασης της PCSK9 και των λιποπρωτεϊνών στη μεμβρανική έκφραση του ICAM-1 σε ενδοθηλιακά κύτταρα HUVECs. 110 3.8 Αγγειογένεση 112 3.8.1. Πειραματική Πορεία- Μελέτη της δράσης της PCSK9 και των λιποπρωτεϊνών στον σχηματισμό κυτταρικών αυλών 114 3.9 Ανοσοαποτύπωση (Western blotting) 116 3.9.1 Προετοιμασία δειγμάτων 116 3.9.2 Ηλεκτροφόρηση Πρωτεϊνών 117 3.9.3 Πηκτή διαχωρισμού και Πηκτή Επιστοίβαξης 119 3.9.4 Διαλύματα ηλεκτροφόρησης - Ηλεκτροφορητικός διαχωρισμός πρωτεϊνικών δειγμάτων 123 3.9.5 Ηλεκτρομεταφορά Πρωτεϊνών σε Μεμβρανικό Υπόστρωμα 127 3.9.6. Αποτύπωση με την τεχνική της ενισχυμένης χημειοφωταύγειας 130 3.9.7. Επώαση μεμβρανών με αντισώματα 131 3.9.8. Αποτύπωση πρωτεϊνών 133 3.10 Μεθοδολογία ELISA (Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay) 136 3.10.1 Ανοσοενζυμικός προσδιορισμός της PCSK9 136 3.10.2 Ανοσοενζυμικός προσδιορισμός της HDL 138 3.10.3 Ανοσοενζυμικός προσδιορισμός της συνδεδεμένης με την HDL PCSK9 140 3.10.4 Ανοσοενζυμικός προσδιορισμός του MCP-1 141 3.11 Lipoprint System 143 3.12 Στατιστική Ανάλυση 145 4ο Κεφάλαιο ~Αποτελέσματα 146 4.1 Αλληλεπίδραση της PCSK9 με τις λιποπρωτεΐνες του πλάσματος 146 4.2 Βιοχημικά και Δημογραφικά Χαρακτηριστικά των ασθενών πριν και μετά την χορήγηση του αντισώματος. 149 4.3 Η δράση της PCSK9 στα αιμοπετάλια 153 4.3.1 Προσδιορισμός PCSK9 σε πλυμένα αιμοπετάλια 153 4.3.2 Η δράση της PCSK9 στη συσσώρευση των πλυμένων αιμοπεταλίων 155 4.3.3 Η δράση της συνδεδεμένης PCSK9 στην LDL και στην HDL λιποπρωτεΐνη στη συσσώρευση των πλυμένων αιμοπεταλίων 158 4.3.4 Μελέτη της λειτουργικότητας των αιμοπεταλίων in vivo στους ασθενείς της 1ης Ομάδας του πληθυσμού της μελέτης. 159 4.4 Η δράση της PCSK9 στην ενεργοποίηση των ενδοθηλιακών κυττάρων (HUVECs). 163 4.4.1. Η δράση της PCSK9 στη μεμβρανική έκφραση του ICAM-1 163 4.4.2. Η δράση της recombinant PCSK9 στην ενεργοποίηση των ενδοθηλιακών κυττάρων (HUVECs). Στην έκκριση του MCP-1 στα ενδοθηλιακά κύτταρα 166 4.4.3 Η δράση της συνδεδεμένης PCSK9 στην LDL και στην HDL λιποπρωτεΐνη στην ενεργοποίηση των ενδοθηλιακών κυττάρων (HUVECs). Στη μεμβρανική έκφραση του ICAM-1 στα ενδοθηλιακά κύτταρα 167 4.4.4 Η δράση της συνδεδεμένης PCSK9 στην LDL και στην HDL λιποπρωτεΐνη στην ενεργοποίηση των ενδοθηλιακών κυττάρων (HUVECs). Στην έκκριση του MCP-1 στα ενδοθηλιακά κύτταρα 168 4.5 Η δράση της PCSK9 στην αγγειογένεση των ενδοθηλιακών κυττάρων HUVECs. 170 4.5.1. Η δράση της recombinant PCSK9 στην αγγειογένεση με τη μέθοδο Matrigel 170 4.5.2. Η δράση της συνδεδεμένης PCSK9 στην LDL και στην HDL λιποπρωτεΐνη στην αγγειογένεση με τη μέθοδο Matrigel 171 4.6 Επίδραση των μονοκλωνικών αντισωμάτων στην αλληλεπίδραση των κυκλοφορούντων CD34+ πρόδρομων κυττάρων με τα αιμοπετάλια. 172 5ο Κεφάλαιο ~ Συζήτηση 175 6ο Κεφάλαιο ~ Βιβλιογραφικές Αναφορές 179 Περίληψη 218 Abstract 221 Δημοσιεύσεις-Διακρίσεις 223 |
| Appears in Collections: | Διδακτορικές Διατριβές - ΧΗΜ |
Files in This Item:
| File | Description | Size | Format | |
|---|---|---|---|---|
| Δ.Δ. ΑΙΚΑΤΕΡΙΝΗ ΤΣΟΥΚΑ 2023 .pdf | Διδακτορική Διατριβή Τσούκα Αικατερίνη | 3.56 MB | Adobe PDF | View/Open Request a copy |
Items in DSpace are protected by copyright, with all rights reserved, unless otherwise indicated.
