Please use this identifier to cite or link to this item:
https://olympias.lib.uoi.gr/jspui/handle/123456789/31443Full metadata record
| DC Field | Value | Language |
|---|---|---|
| dc.contributor.author | Κατούνης, Δημήτριος | el |
| dc.date.accessioned | 2021-11-02T09:43:52Z | - |
| dc.date.available | 2021-11-02T09:43:52Z | - |
| dc.identifier.uri | https://olympias.lib.uoi.gr/jspui/handle/123456789/31443 | - |
| dc.identifier.uri | http://dx.doi.org/10.26268/heal.uoi.11264 | - |
| dc.rights | Attribution-NonCommercial-NoDerivs 3.0 United States | * |
| dc.rights.uri | http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/3.0/us/ | * |
| dc.subject | Πρωτεΐνη TRIM32 | el |
| dc.subject | Νευρικό σύστημα | |
| dc.title | Ο ρόλος της Ε3 λιγάσης TRIM32 στη βιολογία των νευρικών κυττάρων | el |
| dc.title | The role of E3 ligase TRIM32 in neural cell biology | en |
| heal.type | masterThesis | - |
| heal.type.en | Master thesis | en |
| heal.type.el | Μεταπτυχιακή εργασία | el |
| heal.classification | Πρωτεΐνη TRIM32 | - |
| heal.dateAvailable | 2021-11-02T09:44:52Z | - |
| heal.language | el | - |
| heal.access | free | - |
| heal.recordProvider | Πανεπιστήμιο Ιωαννίνων. Σχολή Επιστημών Υγείας. Τμήμα Βιολογικών Εφαρμογών και Τεχνολογιών | el |
| heal.publicationDate | 2021 | - |
| heal.bibliographicCitation | Βιβλιογραφία: σ. 110-117 | el |
| heal.abstract | Το TRIM32 είναι μια Ε3 λιγάση η οποία ανήκει στην οικογένεια των πρωτεϊνών TRIM (Tripartite motif containing protein). Mέσω της επικράτειας RING συνδέει μόρια ουβικιτίνης σε πρωτεΐνες οδηγώντας τες σε πρωτεασωμική αποικοδόμηση. Μεταλλάξεις στο γονίδιο TRIM32, έχουν συνδεθεί με μια σειρά ασθενειών, οι σημαντικότερες από τις οποίες είναι το σύνδρομο Bardet-Biedl και η μυϊκή δυστροφία Limb-Girdl. Αυτές οι διαταραχές ενώ δεν παρουσιάζουν κοινά κλινικά χαρακτηριστικά, φαίνεται να έχουν ένα κοινό νευρολογικό «παρονομαστή». Στην παρούσα μελέτη εστιάσαμε στη μελέτη και τον χαρακτηρισμό της σημειακής μετάλλαξης P130S, η οποία εδράζεται στην επικράτεια B-box της πρωτεΐνης και σχετίζεται με την εμφάνιση του συνδρόμου Bardet-Biedl στον άνθρωπο. Η μελέτη πραγματοποιήθηκε in vitro χρησιμοποιώντας ως κυτταρικό μοντέλο δύο σειρές νευρικής προέλευσης, τα νευροβλαστωματικά κύτταρα Neuro2A τα οποία χαρακτηρίζονται από χαμηλά επίπεδα έκφρασης του ογκογονιδίου N-Myc, και τα SK-N-BE(2)-C στα οποία η έκφρασή του είναι υψηλή εξαιτίας αυξημένου αριθμού αντιγράφων. Μέσω πειραμάτων παροδικής διαμόλυνσης, επιχειρήσαμε να συγκρίνουμε την επίδραση της φυσιολογικής πρωτεΐνης και της μεταλλαγμένης μορφής ΤRΙΜ32(P130S) στον κυτταρικό κύκλο (c-myc, N-Myc, CDK1, p27) την απόπτωση (Bcl2, Bax, p53, caspase-3, Apaf-1, XIAP), την αυτοφαγία (p62, Atg3, Atg12, LC3B) και τη λειτουργία των μιτοχονδρίων (VDAC, Tim23). Τα αποτελέσματα έδειξαν ότι η υπερέκφραση της αγρίου τύπου μορφής της πρωτεΐνης TRIM32, αλλά όχι της μεταλλαγμένης, αυξάνει τα επίπεδα mRNA των γονιδίων c-myc και N-Myc. Ωστόσο, πειράματα ανοσοαποτύπωσης κατά Western έδειξαν ότι τα επίπεδα της πρωτεΐνης C-MYC δεν επηρεάζονται, ενώ και οι δύο μορφές μειώνουν δραματικά τα επίπεδα της πρωτεΐνης Ν-MYC. Παρατηρήσαμε επίσης, ότι η αγρίου τύπου TRIM32 επηρεάζει τον αριθμό των κυττάρων που εισέρχονται στη φάση της μίτωσης, και ο φαινότυπος αυτός συνοδεύεται από μείωση της ενεργοποιητικής φωσφορυλίωσης της κινάσης CDK1 (cyclin-dependent kinase 1) στο κατάλοιπο Thr-161 (CDK1-Thr161), και μια αύξηση της ανασταλτικής φωσφορυλίωσης στο κατάλοιπο Tyr-15 (CDK1-Tyr-15). Παρόμοια ανασταλτική επίδραση στην μίτωση των κυττάρων έχει η μεταλλαγμένη μορφή P130S, ωστόσο στην περίπτωση αυτή διαπιστώσαμε αύξηση των επιπέδων του αναστολέα του κυτταρικού κύκλου p27. Αυτό μας οδηγεί στο συμπέρασμα ότι και οι δύο μορφές της πρωτεΐνης TRIM32 επηρεάζουν ανασταλτικά την πορεία του κυτταρικού κύκλου αλλά δρουν μέσω διαφορετικών μηχανισμών. Δεν παρατηρήθηκαν διαφορές μεταξύ των δύο μορφών στα επίπεδα των ρυθμιστικών μορίων της απόπτωσης που ελέγχθηκαν, με εξαίρεση την πρωτεΐνη XIAP, η οποία αξίζει να σημειωθεί ότι έχει και αυτή ενεργότητα Ε3 λιγάσης όπως και η πρωτεΐνη TRIM32. Συγκρίθηκε τέλος η επίδραση των δύο μορφών στη ρύθμιση της αυτοφαγίας και της [8] λειτουργίας των μιτοχονδρίων, και διαπιστώθηκε ότι σε αντίθεση με τη φυσιολογική πρωτεΐνη, η μετάλλαξη P130S στο γονίδιο TRIM32 επηρεάζει επιλεκτικά τα επίπεδα μορίων-κλειδιών της αυτοφαγίας καθώς και πρωτεϊνών της εσωτερικής και εξωτερικής μεμβράνης των μιτοχονδρίων. Αυτή η παρατήρηση ήταν εξαιρετικά ενδιαφέρουσα, και μελλοντικά πειράματα αναμένεται να δώσουν απάντηση στο ερώτημα, κατά πόσον η πιθανή απορρύθμιση του μηχανισμού της αυτοφαγίας και της μιτοχονδριακής λειτουργίας από την μετάλλαξη P130S μπορεί να συνδέονται με τον παθογενετικό μηχανισμό των νόσων Bardet-Biedl και Limb-Girdl. | el |
| heal.abstract | TRIM32 is an E3 ligase that belongs to the TRIM (Tripartite motif-containing protein) family of proteins. Via its RING domain, it ubiquitinates protein substrates and marks them for proteosomal degradation. Mutations in the TRIM32 gene have been associated with a number of diseases, the most important of which are the Bardet-Biedl syndrome and the Limb-Girdl muscular dystrophy. These disorders, while not having common clinical features, appear to have a common neurological "denominator". In the present study we focused on the characterization of the P130S point mutation, which is located in the B-box domain of the protein, and has been associated with the occurrence of the Bardet-Biedl syndrome in humans. The study was performed in vitro using as a model two cell lines of neuronal origin, namely the neuroblastoma cells Neuro2a, which are characterized by low expression of the N-Myc oncogene, and the SK-N-BE(2)-C in which the expression of this gene is relatively high due to increased number of copies. In transient transfection experiments, we attempted to compare the effects of normal protein and of the TRIM32(P130S) mutant on cell cycle (c-myc, N-Myc, CDK1, p27), apoptosis (Bcl2, Bax, p53, caspase-3, Apaf 1, XIAP), autophagy (p62, Atg3, Atg12, LC3B) and mitochondrial function (VDAC, Tim23). The results showed that overexpression of the wild-type TRIM32, but not of the mutant protein, increased the c-myc and N Myc mRNA levels. However, Western immunoblotting experiments revealed that the protein levels of c MYC remained unaffected, and also, that both forms are capable to dramatically reduce the N-MYC protein levels. We have also observed that wild-type TRIM32 reduces the number of cells entering mitosis, and this phenotype is accompanied by a decrease in the activating phosphorylation of CDK1 kinase (cyclin dependent kinase 1) on threonine 161 (Thr161) and an increase in the inhibitory phosphorylation on tyrosine 15 (Tyr15). The mutant TRIM32(P130S) exerts a similar inhibitory effect on mitosis, however in this case we found a consistent increase in the levels of the cell cycle inhibitor p27. We therefore concluded that both forms of the TRIM32 protein can inhibit cell cycle progress, however by acting through different mechanisms. There was no influence of either form in the in the expression of the apoptosis regulators tested, with the exception of the XIAP protein, which it is worth-mentioning that has also E3 ligase activity (similar to TRIM32). Additionally, we compared the effect of the two forms on the regulation of autophagy and mitochondrial function, and we found that in contrast to the normal protein, the TRIM32(P130S) mutant selectively affects the levels of key molecules of autophagy as well as of inner and outer mitochondrial membrane proteins. This was particularly interesting, and future experiments are expected to address the emerging question of whether a potential deregulation of autophagy mechanisms and [10] mitochondrial function by the P130S mutation may be linked to the pathogenetic mechanisms of Bardet Biedl and Limb-Girdl diseases. | en |
| heal.advisorName | Μιχαηλίδης, Θεολόγος | el |
| heal.committeeMemberName | Μιχαηλίδης, Θεολόγος | el |
| heal.committeeMemberName | Τράγκα, Θεώνη | el |
| heal.committeeMemberName | Γεωργίου, Ιωάννης | el |
| heal.academicPublisher | Πανεπιστήμιο Ιωαννίνων. Σχολή Επιστημών Υγείας. Τμήμα Βιολογικών Εφαρμογών και Τεχνολογιών | el |
| heal.academicPublisherID | uoi | - |
| heal.numberOfPages | 117 σ. | - |
| heal.fullTextAvailability | true | - |
| Appears in Collections: | Διατριβές Μεταπτυχιακής Έρευνας (Masters) - ΒΕΤ | |
Files in This Item:
| File | Description | Size | Format | |
|---|---|---|---|---|
| Μ.Ε. ΚΑΤΟΥΝΗΣ ΔΗΜΗΤΡΙΟΣ 2021.pdf | 3.57 MB | Adobe PDF | View/Open |
This item is licensed under a Creative Commons License
